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AML-12小鼠正常肝細(xì)胞
貨號：BY-0681
品牌：乾思細(xì)胞
規(guī)格：T25瓶
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AML-12 小鼠正常肝細(xì)胞：特性、應(yīng)用與研究價(jià)值

AML-12 細(xì)胞是源自 C57BL/6J 小鼠的正常肝細(xì)胞系，由美國斯坦福大學(xué)通過永生化技術(shù)構(gòu)建，因其接近原代肝細(xì)胞的生物學(xué)特性，成為肝臟生理、病理及藥物代謝研究的重要工具。以下從細(xì)胞特性、培養(yǎng)要點(diǎn)、應(yīng)用場景及研究進(jìn)展等方面展開介紹。

一、細(xì)胞特性與生物學(xué)背景

  1. 起源與永生化
    AML-12 細(xì)胞來源于 C57BL/6J 小鼠的正常肝細(xì)胞，通過轉(zhuǎn)染 SV40 病毒大 T 抗原實(shí)現(xiàn)永生化，保留了肝細(xì)胞的典型形態(tài)和功能特征，如上皮樣貼壁生長、多邊形細(xì)胞形態(tài)及清晰的細(xì)胞間連接。
  2. 功能特征
    • 代謝能力：表達(dá)多種肝臟特異性酶，如細(xì)胞色素 P450 家族（CYP1A2、CYP2B10、CYP3A11 等）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT）和谷胱甘肽 S - 轉(zhuǎn)移酶（GST），可模擬肝細(xì)胞的藥物代謝和**功能。
    • 合成能力：能合成白蛋白（Albumin）、轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）等肝臟特異性蛋白，維持正常肝細(xì)胞的分泌功能。
    • 信號通路：保留肝細(xì)胞膜表面受體（如胰島素受體、低密度脂蛋白受體）及相關(guān)信號通路，適用于代謝調(diào)控機(jī)制研究。
  3. 核型與穩(wěn)定性
    該細(xì)胞系核型接近正常小鼠肝細(xì)胞（2n=40），在常規(guī)培養(yǎng)條件下可穩(wěn)定傳代 50 代以上，且功能特性無顯著衰減，適合長期實(shí)驗(yàn)需求。

二、培養(yǎng)條件與操作要點(diǎn)

  1. 培養(yǎng)基組成
    推薦使用 DMEM 高糖培養(yǎng)基（含 4.5 g/L 葡萄糖），添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 非必需氨基酸（NEAA）、1 mM 丙酮酸鈉、100 U/mL 青霉素 - 鏈霉素，及關(guān)鍵生長因子組合（5 μg/L 胰島素、5.5 μg/L 轉(zhuǎn)鐵蛋白、5 ng/L 硒酸鈉，即 ITS-G）。
  2. 培養(yǎng)環(huán)境
    需在 37℃、5% CO?的濕潤培養(yǎng)箱中孵育，貼壁密度達(dá) 80%~90% 時(shí)進(jìn)行傳代，消化液推薦使用 0.25% 胰酶 - EDTA，消化時(shí)間控制在 2~3 分鐘，避免過度消化損傷細(xì)胞。
  3. 質(zhì)量控制
    • 支原體檢測：定期通過 PCR 或熒光染色法檢測，確保無支原體污染。
    • 功能驗(yàn)證：可通過檢測白蛋白分泌水平或 CYP 酶活性，驗(yàn)證細(xì)胞功能完整性。

三、應(yīng)用場景與研究進(jìn)展

  1. 肝臟疾病建模
    • 非酒精性脂肪肝（NAFLD）：通過高脂培養(yǎng)基或棕櫚酸誘導(dǎo)脂質(zhì)堆積，模擬肝細(xì)胞脂肪變性，研究 PPARγ、AMPK 等信號通路在脂肪代謝中的作用。
    • 肝損傷與修復(fù)：利用 CCl?、APAP（對乙酰氨基酚）等肝毒素誘導(dǎo)氧化應(yīng)激模型，探討 Nrf2、NF-κB 等通路在肝損傷中的調(diào)控機(jī)制。
  2. 藥物代謝與毒性評估
    • 代謝酶誘導(dǎo) / 抑制：通過檢測 CYP 酶活性變化，評估藥物（如利福平、酮康唑）對肝臟代謝功能的影響，助力藥物相互作用研究。
    • 肝毒性篩選：對比 AML-12 細(xì)胞與肝癌細(xì)胞系（如 HepG2）的毒性反應(yīng)，篩選潛在肝毒性化合物，降低臨床前研究風(fēng)險(xiǎn)。
  3. 代謝調(diào)控機(jī)制研究
    • 糖脂代謝：通過胰島素刺激實(shí)驗(yàn)，研究 PI3K/Akt 通路對葡萄糖攝取和糖原合成的調(diào)控，或通過油酸處理探討脂質(zhì)合成與 β- 氧化的平衡。
    • 膽汁酸代謝：利用法尼醇 X 受體（FXR）激動(dòng)劑 / 拮抗劑，分析膽汁酸合成關(guān)鍵酶（如 CYP7A1）的表達(dá)變化。
  4. 新型療法開發(fā)
    • 基因編輯：通過 CRISPR-Cas9 系統(tǒng)敲除 / 過表達(dá)特定基因（如 PNPLA3、TM6SF2），研究遺傳性肝病的發(fā)病機(jī)制。
    • 納米藥物遞送：利用 AML-12 細(xì)胞評估肝靶向納米載體的攝取效率及毒性，優(yōu)化藥物遞送系統(tǒng)設(shè)計(jì)。

四、局限性與替代模型

盡管 AML-12 細(xì)胞具有接近原代肝細(xì)胞的優(yōu)勢，但其永生化特性可能導(dǎo)致部分基因表達(dá)與體內(nèi)肝細(xì)胞存在差異（如某些肝特異性轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平下調(diào)）。因此，在需要更真實(shí)模擬體內(nèi)微環(huán)境的研究中，可結(jié)合原代肝細(xì)胞、肝組織切片或類器官模型進(jìn)行驗(yàn)證。

AML-12 細(xì)胞憑借其穩(wěn)定的生物學(xué)特性和便捷的培養(yǎng)條件，已成為肝臟研究領(lǐng)域的經(jīng)典工具。隨著單細(xì)胞測序、空間組學(xué)等技術(shù)的發(fā)展，結(jié)合 AML-12 細(xì)胞的功能研究將進(jìn)一步揭示肝臟生理病理的分子機(jī)制，為肝病治療和藥物開發(fā)提供更精準(zhǔn)的理論依據(jù)。